实验课程

《分子生物学实验课》简介

作者: | 来源: | 发布日期:2015-08-18 | 阅读次数:

 

《分子生物学实验课》简介

课程代码:3087025
课程性质:必修
课时:54学时
学分:3学分
先修课程:分子生物学、基因工程、蛋白质工程
适用专业:生物技术、生物科学

实验课程内容
第一部分教学目的和基本要求

    实验一分子生物学实验是在第六学期开设的一门综合性实验,是在《分子生物学》、《基因工程》、《蛋白质工程》理论学习的基础上开设的一门技术实践课。旨在通过实验教学进一步巩固理论课讲授的基本理论,培养学生独立操作的能力,综合分析问题的能力,树立学生科学务实和团结协作的精神,以利于将来运用所学知识解决科学与生产中的实际问题。
    实验二本课程围绕分子生物学的核心技术——分子克隆,从目的基因的获得,质粒载体提取,体外重组转化大肠杆菌和蓝白筛选一套完整的原核目的基因克隆的程序,到重组基因的诱导表达、提纯和鉴定等一系列获得目标蛋白的实验方法。

第二部分实验课程内容与学时分配

序号

实验项目名称

实验内容

学时

分配

实验

要求

实验

类型

每组

人数

备注

1

细菌质粒的提取和鉴定

碱裂解法提取质粒

6

必做

综合性

2

 

2

重组质粒的酶切

双酶切

4

 

 

 

 

3

PCR扩增技术及产物回收

PCR技术及胶回收

8

 

 

 

 

4

PCR产物与载体的连接

目的基因与T载体连接

4

 

 

 

 

5

感受态细胞的制备

CaCl2法制备感受态细胞

4

 

 

 

 

6

大肠杆菌的转化及蓝白筛选

热激转化及阳性菌筛选

4

 

 

 

 

7

重组蛋白在E.coli中的诱导表达

IPTG诱导表达,菌体收集及破壁

4

 

 

 

 

8

蛋白质的亲和层析纯化

NiNTA胶层析方法

6

 

 

 

 

9

重组蛋白的SDS-PAGE鉴定

蛋白质电泳技术

6

 

 

 

 

10

Western-blotting

转膜及显色反应

8

 

 

 

 

 
第三部分主要仪器设备

序号

实验设备名称

对应实验项目

数量

备注

1

PCR

PCR技术

3

 

2

冷冻离心机

细菌质粒的提取、感受态细胞的制备等

2

 

3

超声波破碎仪

重组蛋白在E.coli中的的诱导表达

1

 

4

分光光度计

蛋白诱导表达

2

 

5

电泳仪、电泳槽及转移槽

重组蛋白的SDS-PAGE鉴定,Western-blotting

8

 

6

高压灭菌锅

感受态细胞的制备等

1

 

 
考核方式 :实验论文:40%,考试(口试或笔试):60%
 
教材和主要参考资料

1. J. Sambrook 分子克隆实验指南(第三版)上、下册 科学出版社 2002
2. 卢圣栋 现代分子生物学实验技术
3. C. W. Dieffenbach PCR技术实验指南
4. 汪家政 范明 蛋白质技术手册 科学出版社 2002